病毒性腹泻相关研究报告带来的启示
亲：您觉得这篇文章很棒，请分享朋友圈吧，您的分享成就世界的共享！
病毒性腹泻疾病一直是困扰中国各大猪场的难题，节选了部分IPVS（世界猪病大会）大会关于病毒性腹泻研究报告，以期给大家一些启发或思考。
一、病原及流行病学
国内某诊断中心收集疑似PEDV腹泻的粪便和肠道样品。针对PEDVM基因，TGEVM基因和PRoVvp7基因，分别进行RT-PCR检测。结果表明PEDV仍然是导致新生猪病毒性腹泻主要病原体。TGEV和PRoV只占其中的一小部分。然而，RT-PCR检测结果表明，这三种病毒的阳性率较以往有所提高。值的注意的是出现了更广泛的PRoV感染（平均41.44%），是之前的4倍。
美国腹泻猪场分离毒株表明，相比美国经典毒株，基因型有了较大变异。从年10月至年2月，对通过实时RT-PCR确诊为PEDV阳性的例样品的PEDVS1基因（保护性抗原的第一个2.2kb基因序列）进行测序，与GeneBank中年5月和6月收录的10株美国毒株PEDV和株非美国毒株PEDV进行比对。测定的例样品PEDVS1基因序列进行相互比对，并与年4月的美国毒株（被命名为原始美国毒株）进行比对，其中例的核酸序列相似度达99.0%-%。相反，仅有14例与原始美国毒株的核酸序列相似度达92.4%-93.8%，这14株彼此之间的相似度达99.6%-%（被命名为变异美国毒株）。
BLAST的结果显示，这14株变异株的S1序列与中国PEDV分离株CH/HBQX/10（JX）的同源性达99.4-99.6%。这14株PEDV变异株RNA序列与原始美国毒株序列比对结果显示，在S1区的第一个9nt中都有相同的个核酸碱基发生了变异。此外，这14株变异PEDV的S1区共有15nt的碱基缺失（分别在不同位置有1nt、11nt和3nt的碱基缺失），与美国原始株比对在一个位置有6nt的碱基插入。有趣的是，在这14株变异株中，发现PEDV毒株主要的nt碱基的改变和相同的基因缺失与插入部分，在中国、韩国和欧洲之前鉴定的某些PEDV毒株中也有发现。
启示一
猪流行性腹泻病毒（PEDV），猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）依然是国内三个导致病毒性腹泻的主要病原体，发病率增幅较快，PEDV比重最大，但PRoV上升趋势最快。同时毒株出现了较大的变异，给病毒性腹泻防控带来挑战。提示接下来对该类疾病防控，要依据当前的流行病学做出改变。
二、病毒和抗体动力学
选取56头对PED，TGE和PRRS表现阴性的三周龄仔猪，用这些仔猪来灌喂分离的PEDV毒（USA/Iowa//）。这些猪在接种后观察76天，在此期间，定期观察其临床症状，检测排泄的粪便中的病毒以作为组织学分析。在0天及其以后每隔7天收集血清样品，通过ELISA方法测定PEDV抗体。临床腹泻症状开始于接种后的3或4天，接种后10天腹泻开始减弱。粪便中的PEDV在接种后7天、14天、21天和28天的检出率分别为%、88%、42%和0%。实验接种后抗PEDV的IgM、IgA和IgG抗体水平随时间变化如图1所示。短期内，首先检测到低水平的IgM，随后会有一个高水平的IgA和中等水平的IgG。在接种后的3或4周IgA和IgG抗体含量会逐渐减少。
人工感染PEDV后，经过全病毒的ELISA检测，发现猪体内产生了所有的主要同型病毒特异性抗体，这也表明了血清学检测可以用于猪PEDV的排毒监测。IgA抗体检测可能是监测体液免疫应答的一种比较好的方式。但应当注意的是，抗PEDV抗体在病毒侵入后持续的时间不长。
启示二
依据猪只得临床表现，可向前推断感染时间，分析在那个时间段管理中存在的漏洞。IgA抗体的保护，提示疫苗的选择？
三、抗体检测方法
根据上一个实验提出的IgA抗体检测可能是监测体液免疫应答的一种比较好的方式，有美国研究人员做了相关研究，基于PEDVS基因的S1部分，研发了酶联免疫吸附法（ELISA）。采集个场的血清样品，用S1-酶联免疫吸附法（s1-ELISA）进行诊断，敏感性为%，诊断的特异性为94%。通过初乳获取被动免疫可保护4-14日龄的哺乳仔猪。本研究选用已知PEDV情况场的初乳样品，监测PEDV保护力，改进现有的以IgG为基础的PEDVELISA检测方法，检测初乳和奶水中的IgA。在初乳样品中，PEDV阳性场的样品，抗-IgGPEDV抗体阳性率为90.3%（28/31），抗-IgAPEDV抗体阳性率为%（31/31）；而PEDV阴性场的样品，抗-IgGPEDV抗体阳性率为8.9%（9/），抗-IgAPEDV抗体阳性率为0（0/）。结果显示，以IgA为基础的测定方法特异性更高。
血清中IgG抗体的存在，与其对抗主要在粘膜表面复制的病原体如PEDV、为小猪提供的保护力不是正相关的。在这种情况下，检测初乳或普通乳汁中的IgA可能是合适的。由于目前美国没有可用的PEDV疫苗，给妊娠母猪返饲PEDV阳性仔猪的肠道及其内容物，人为地刺激乳源免疫力，试图减少PEDV的持续时间和发病规模。然而，因为肠内容物的PEDV病毒滴度的非同源性，整个猪群的乳源免疫力感应是不一致的。因此，监测初乳和普通乳汁中的IgA浓度对保证仔猪获得足够的被动免疫很重要。
启示三
母乳中的IgA抗体滴度高，为哺乳仔猪对抗肠道冠状病毒提供了保护力，如猪传染性胃肠炎（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV），而母乳中的IgG抗体通常不足以保护哺乳仔猪，血清中的中和抗体亦不足以保护初生仔猪。临床对疫苗效果的评价应侧重IgA的水平，可利于对疫苗的选择。
四、关于疫苗免疫
通过疫苗防控病毒性腹泻，已经是公认的最好的防御措施，但活疫苗和灭活苗的免疫效果如何，疫苗如何组合免疫效果更好，韩国研究人员做了相关的实验。本研究使用的活疫苗和灭活苗均来自韩国，20头配种母猪随机分成4组，每组5头。4组分别为非免疫阴性组、灭活苗免疫组和灭活苗加强组（K/K）、活苗免疫组和活苗加强组（L/L）、活苗免疫组和灭活苗加强组（L/K）。根据标准疫苗免疫程序和指导方针进行免疫PEDV疫苗。母猪免疫两次，分娩前4周和前2周各免疫一次。疫苗进行肌肉注射免疫。血清和初乳的ELISA、血清中和试验根据标准方法进行。结果表明，母猪血清样品中，K/K组有较高的IgG抗体滴度，比L/L组或L/K组高2倍，但是3组之间的IgA水平差异不显著。初乳样品中，K/K组的IgA水平最高。L/L组和L/K组的IgG滴度很相似。三组仔猪血清的IgA滴度都很接近。K/K组的所有样品与L/L组和L/K组相比，其SN滴度最高（图3）。母猪和仔猪的血清样本相比，初乳中的SN滴度最高，K/K组稀释因子达到。在母猪血清样本中，K/K组SN滴度最高，稀释因子达到。在仔猪血清样本中，K/K组SN滴度最高，稀释因子达到，其次是L/L组为达，L/K组达。
血清中和活性是疫苗效力最重要的因素。母猪和仔猪免疫K/K组具最有效的中和活力，尤其体现在初乳中。这个发现非常重要，因为关乎到PEDV疫苗接种策略，PEDV主要依靠被动免疫获得有效的保护性抗体，哺乳仔猪在摄取母猪初乳时获得。
尽管，PEDV疫苗的效力普遍还存在争议，我们目前的研究表明，免疫和加强免疫灭活苗能够刺激产生最高水平的IgG和IgA抗体滴度。K/K组能为仔猪提供最有效的中和抗体活性。K/K组免疫程序可能是预防PEDV的最好选择。
启示四
疫苗的选择，以及疫苗免疫时间的选择，都需要通过实验来验证。当然K/K组免疫法这个是否适用于中国，最好的方法还是如韩国学者一样，在本场做一下对比试验。
五、关于返饲
美国研究人员已经用感染肠道组织的返饲来诱导免疫。然而，在各种诱导免疫的返饲报告中发现其几乎没有效果，这包括血清学效应的持续时间和粘膜抗体的产生。
在母猪妊娠80天返饲一次或三周之后重复返饲，二者均在3周表现统一的血清学变化。再次返饲后并没有产生显著的效果。在一项研究报告中，返饲后的6-8周，平均抗体水平已经回归到了基准水平，并且在10日龄猪体内几乎检测不到血清抗体。在另一项报告中，血清抗体效价水平参差不齐，仅一半的仔猪和成猪血清中含有抗PEDV抗体。在母猪的乳中（未收集初乳）、母猪或仔猪的粪便中无论什么时候都检测不到PEDV的IgG或IgA抗体。
用已感染PEDV的肠道内容物来进行返饲是一种有效诱导母猪产生抗PEDV抗体反应的方法。然而，抗病毒衣壳抗体ELISA并不能证明仔猪可以获得母源免疫力，同时也不能检测到粪便中的分泌抗体。一般来说，分泌型的IgA抗体是抵抗肠道病原体感染的关键。因此，很有可能在母猪体内难以产生有效PEDV免疫反应或将此免疫力转移给仔猪，同时也有可能是抗病毒衣壳蛋白ELISA也检测不到保护效应。我们仍然不知道哪种可能性是正确的，但是已经发现粪便中含有大量的总IgA，而且混合在粪便中的血清抗体很容易检测到。因此，检测粪便ELISA的阴性结果意味着特异性抗体是不存在的。
启示五
PEDV感染可以产生一个短暂的免疫反应，可能在母猪和仔猪体内不会产生坚实的保护力。效果是局限的，参照美国的返饲结果，结合中国更为复杂的疾病，返饲可能带来的其他疾病传播，不建议返饲。
(免责申明：本公共平台所有资料都来于网络收集，以供给大家学习、交流为目的。如本北京好的治疗白癜风的医院北京可以治疗白癜风的医院